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人恶性黑色素瘤细胞WM115培养指南 - 俄罗斯专享会294

发布时间:2025-03-21   信息来源:吉群以

人恶性黑色素瘤细胞WM115培养指南

人恶性黑色素瘤细胞WM115培养指南 - 俄罗斯专享会294

一、细胞培养条件

细胞名称:人恶性黑色素瘤细胞WM115
生长特性:贴壁
冻存条件:无血清冻存液
培养体系:MEM+10%FBS+1%P/S
传代方法:首次建议1:2传代
传代情况:每2天更换培养基
备注:使用无菌离心管收集培养基,以便进行对比培养。如对比结果不理想,建议直接购置俄罗斯专享会294的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

收到细胞后,将其培养至良好状态后,灌满完全培养液并封好瓶口,这样可以确保细胞在运输后的存活率。首先,使用75%酒精对整个细胞瓶进行喷洒消毒,然后在超净台中进行严格无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后再进行下一步处理。通过显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照记录(建议记录40x, 100x, 200x各一张)。前三天的照片将作为售后支持的重要依据,如未提供照片将默认收到状态良好。在传代后,建议一瓶继续使用原瓶的完全培养基,另一瓶则使用自配的完全培养基进行对比实验,换液后可将瓶盖轻微松开。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代:

在细胞汇合度未超过80%时,将培养瓶中的完全培养液收集至离心管中,保留5ml完全培养基,放入37℃、5%CO2孵箱维持培养;在细胞密度超出80%时则需进行传代,具体步骤如下:

  1. 弃去培养上清,并用不含钙、镁的PBS清洗细胞1-2次。
  2. 加入约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,观察细胞在显微镜下的状态,若细胞大部分变圆并脱落,赶紧取回操作台,轻轻敲击培养瓶后加入5ml以上完全培养基以终止消化。
  3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后,吸出并转移至15ml离心管中,在1000RPM条件下离心5分钟,弃去上清,补充1-2ml完全培养基重悬。
  4. 将细胞悬液按1:2的比例进行分瓶传代(两个T25瓶),补充新的完全培养基至5-8ml/瓶,然后放入37℃、5%CO2的细胞培养箱中继续培养。

b、细胞冻存:

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%时,弃去培养液,用PBS清洗细胞一次。
2. 加入约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液,观察变圆后加入5ml完全培养液终止反应,吹打以使细胞脱落,再转移至15ml离心管中,在1000rpm条件下离心5分钟。
3. 弃去上清,加入1ml雅吉生物无血清冻存液(货号:C7001),混匀后转移至冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱,如需后期转入液氮罐中,需在-80℃冰箱存放24小时以上再转入。

c、细胞复苏:

1. 从液氮中取出冻存管(佩戴防护面具),快速置入37℃水浴中解冻,直至冻存管内无结晶,然后用75%酒精擦拭外壁。
2. 将细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中,进行1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清,沉淀细胞用5ml完全培养基重悬,接种至T25培养瓶,放入37℃、5%CO2培养箱中。
4. 第二天更换新鲜完全培养基并继续培养。

四、注意事项

在运输过程中,有些细胞可能会因附着不牢而脱落,这属于正常现象。如脱落情况较多,可将培养液收集至离心管中,1000rpm离心5分钟,收集上清进行过渡培养。沉淀后加入胰酶1-2ml,轻轻吹打,重悬后消化1-2分钟,再加入5ml完全培养基终止反应,旋转离心并重悬。最终以1:2的比例分瓶传代(两个T25瓶),补充完全培养基后放入细胞培养箱中培养。

五、售后条款

1. 如细胞出现问题,重发的情况包括:
- 运输过程中细胞丢失、瓶身破损或培养液严重漏液,需重发;
- 收到产品48小时内如出现污染,提供真实实验结果经核实后重发;
- 常温发货细胞在24小时后,干冰发货细胞复苏后24小时内未存活,需提供清晰照片,才可重发;
- 收到细胞后2-3天需拍照记录,若超出3天未通报,将视为合格。

补充条款包括:客户造成污染、不正确操作、使用非推荐培养体系等情况不予重发。具体责任将视情况而定。

我们致力于为您提供优质的俄罗斯专享会294细胞培养服务,以确保您实验的成功与顺利。