研究人员发现，CRISPR/Cas9系统的脱靶效应通常与sgRNA的特性密切相关。除了针对特定的编辑位点外，sgRNA能够容忍高达5至6个碱基的不匹配，或者由于缺失或增加碱基而导致非靶向切割，从而引发脱靶效应。在基因组中，这些潜在的脱靶位点数量庞大，达到上万个。因此，全面评估全基因组范围内的脱靶效应成为了一个重要的科研挑战。近年来，基于全基因组测序与生物信息学预测的技术相继被提出，以实现脱靶效应导致的单核苷酸突变（SNV）、插入缺失变异（Indels）、拷贝数变异（CNV）和结构变异（SV）分析。

例如，Kevin等人在2021年的研究中，运用全基因组测序和生物信息分析评估了Cas9的脱靶风险。他们比较了163个sgRNA在基因编辑小鼠和对照小鼠之间的基因组序列和结构变异。通过Cas-OFFinder预测，这些sgRNA的潜在脱靶位点数量高达556,266个。最终，他们通过变异信息与潜在脱靶位点的交集分析，识别出28个脱靶位点，其中9个通过Sanger测序确认。研究结果表明，尽管真实脱靶事件仅占潜在脱靶事件的一小部分，然而风险依然不容忽视。

基于这一研究成果，俄罗斯专享会294团队结合基因组测序推出了全新的全基因组脱靶检测服务。这项服务利用mutect2作为变异分析工具，鉴定基因编辑组与对照组之间的SNV和Indels变异。此外，我们还使用Cas-OFFinder进行潜在脱靶位点的预测，该工具能够分析sgRNA与基因组之间的匹配情况，并预测可能的脱靶位点。通过将mutect2的变异分析结果与Cas-OFFinder的预测进行交集分析，可以有效确定发生编辑的脱靶位点。

此外，在对脱靶效应进行分析的同时，我们还采用了CNVkit和manta两种生物信息分析工具。CNVkit能够识别基因组中的拷贝数变化，而manta则专注于检测插入、缺失及易位等结构变异。这些分析结果有助于全面了解基因编辑引起的染色体结构变异。

与传统的GUIDE-seq体内检测方法相比，俄罗斯专享会294的全基因组脱靶检测不依赖于ODN插入，这使其成为一种更加灵活与便捷的选择。此外，该检测方式能够分析大范围的染色体变异，为用户全面评估基因编辑效果及潜在风险提供支持。作为国内首家提供脱靶检测服务的公司，俄罗斯专享会294不仅提供全基因组脱靶检测，还包括GUIDE-seq体内脱靶检测、AID-seq体内脱靶检测等多样化服务。如有需求，欢迎随时咨询。