引言 朊病毒是一类会引发人类和动物脑部蛋白质异常折叠的可传播病原体，感染后可导致脑损伤，且常常是致命的。此类神经退行性疾病的实例包括羊瘙痒症、疯牛病（牛海绵状脑病）和克雅二氏病。传统上，研究朊病毒需要进行长时间的生物测定，对受感染动物进行为期1到6个月的观察。这种方法不仅耗时长，而且养殖感染动物的成本也极高。为了应对这一挑战，蒙大拿州汉密尔顿的落基山实验室开发了一种新型朊病毒接种测定法，称为实时震荡诱导转化测定法（RT-QuIC），该方法可以对受感染样本中的朊病毒水平进行终点定量检测。与传统方法相比，这种检测方式更加迅速且通量更高，仅需20小时即可完成，灵敏度甚至超过全动物模型。例如，BMGLABTECH的FLUOstarOmega酶标仪是唯一能够长时间震荡和培养微孔板的设备，得益于其坚固的“德国制造”结构。RT-QuIC检测样本每隔15分钟进行一次测量，可持续20到68小时，在此期间交替震荡1分钟与静置1分钟。我们开发了一个脚本来控制激活测定所需的振荡和静置时间。

检测原理 RT-QuIC检测法用于估算朊病毒接种的相对数量，通过对样本的连续稀释进行测量，从而统计估算接种剂量（SD）。此检测方法在正常朊病毒蛋白中添加极少量的传染性朊病毒，诱发蛋白发生类似疾病的错误折叠。测定过程中，我们通过测量系列稀释度并确定接种活性损失（SD50），即终点稀释度来进行量化。

实验步骤 在整个20到68小时的过程中，仪器被设定在42°C的恒温下进行孵育。我们编写了两个测试运行协议的脚本。第一个协议设定为振荡板一分钟，然后静置一分钟；第二个协议每15分钟使用底部的光学镜进行一次荧光终点测量。荧光染料硫黄素T（ThT）被用作朊病毒接种的标记，当ThT与朊病毒蛋白结合时，发生聚合反应，从而导致荧光强度随时间增长。

仪器设置 在荧光终点的底部读数中，激励滤光片设定为450纳米，排放滤光片设定为480纳米，闪光灯的增益为2000，震荡速率为700RPM，使用双轨道进行振荡。

分析方法 使用斯皮尔曼-凯伯（Spearman-Kärber）分析法估算每克组织中50%的孔出现ThT阳性反应的播种剂量或稀释倍数（SD50/g）。在进行Spearman-Kärber分析时，需确保选择的稀释系列中至少有一个稀释度表现为100%的ThT阳性反应，同时也有一个稀释度显示为0%。

结果与讨论 利用软件脚本对RT-QuIC检测进行了20至68小时的定期测量，数据来自8个重复孔的相对荧光单位平均值。即使是在整个测量过程中，孵育温度也始终保持在42°C，FLUOstarOmega酶标仪的高品质设计和构造使研究人员能够在不影响震荡和温度的情况下连续测量数天。数据被稳定地收集并输出到BMGLABTECH的数据分析软件（MARS）和Excel中。我们的研究表明，RT-QuIC检测法与传统的生物测定结果高度相关，且能够在接种后仅十天内对动物样本进行有效检测。

结论 采用RT-QuIC检测法和功能强大的酶标仪，能够更快速、高效地评估朊病毒接种情况。经验证的可用RT-QuIC检测的传染性海绵状脑病样本已涵盖仓鼠、绵羊、鹿的慢性消耗性疾病、克雅氏病（CJD）及牛海绵状脑病（BSE）。通过使用BMGLABTECH的Omega系列酶标仪，研究者能够在20到68小时内实现快速、高通量的检测。这种先进的检测方法不仅提高了监测效率，还充分展示了我们品牌的硬实力，成为生物医疗领域的一项重要创新。关于俄罗斯专享会294的更多信息，请关注我们的官方网站以获取更多精彩内容和相关视频。